本期普拉特泽生物跟大家一起学习的是对水稻花样本进行TUNEL染色，TUNEL染色是一种常用的细胞凋亡检测方法。它基于凋亡过程中DNA双链断裂，利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）将标记的dUTP连接到DNA断裂处，从而检测凋亡细胞。而普拉特泽生物——病理检测平台也非常重视这一点，为广大科研人员提供酵TUNEL染色实验外包服务，同时也详细说明了TUNEL染色步骤分享给大家一起共勉！

一、        实验目的

对水稻花样本进行TUNEL染色。

二、        实验样本及分组

39个水稻花石蜡样本

  三、实验结果

Tunel

 PI

图1 TUNEL染色示意图（400×）

四、实验结论

组织中有细胞凋亡，全细胞背景为红色荧光，凋亡部位为绿色荧光（Merge后呈黄色）

五、 实验材料

1.主要仪器

2.主要试剂

一、        实验原理

细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180~200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光标记，产生很强的颜色反应，从而可以通过显微镜检测细胞凋亡的情况。本次实验所用到的试剂盒中凋亡样本会被标记为绿色，与碘化丙啶标记的红色全细胞背景重叠后呈黄色。

二、        方法步骤

1、  石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ10min-无水乙醇Ⅱ10min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。

2、  修复：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止液体流走），在圈内滴加蛋白酶K工作液覆盖组织，室温孵育15min。将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

3、  破膜：切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织，常温下孵育10min，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

4、  末端标记反应：取反应液加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃水浴锅孵育60min，湿盒内加少量水保持湿度。

5、  终止反应：玻片放入2×SSC室温浸泡15min终止反应。将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

6、  背景染色：将片子置于1ug/ml的碘化丙啶中，在黑暗条件下染背景。玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上避光晃动洗涤3次，每次5min。

7、  封片：切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

8、  镜检拍照：切片于激光共聚焦显微镜下观察并采集图像。

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