免疫荧光检测实验由普拉特泽生物为大家总结分享，普拉特泽生物病理实验平台专业承接HE染色实验外包、原位杂交等病理实验代做服务，积累专业丰富的实验操作经验。上期我们分享《免疫荧光染色操作步骤以及目的——细胞篇》后大家都说还想继续了解，那今天咱们就为大家专门出一期关于组织篇免疫荧光染色操作步骤以及目的，快点学起来吧！

一、实验目的

通过细胞免疫荧光技术，检测TRPV4、BK蛋白在组织中的表达情况。

二、实验样品及分组

样本：大鼠附睾组织

指标：TRPV4、BK

三、实验结果

图1  IF染色图200×

四、实验结论

IF染色结果显示：

TRPV4、BK蛋白在组织中有特异性表达，阳性染色为相应荧光素标记的绿色和红色，胞核为DAPI标记的蓝色。

五、实验材料

1、主要仪器

2、主要试剂

五、实验原理

免疫荧光细胞是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

七、实验步骤

1.60℃烤片30 min；

2.切片脱蜡至水：先将切片置于二甲苯中10 min，2次。然后依次在100%，95%，85%和75%乙醇，每级放置5-10 min。再用蒸馏水浸洗5 min；

3.热修复抗原：将切片浸入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）,微波炉高火加热8min后拿出，冷却至室温。冷却后PBS（pH7.2~7.6）洗涤3 min x 3次；

4.加入3% H2O2，室温10分钟以灭活内源性酶。PBS冲洗3 min x 3次；

5.血清封闭：切片滴加血清放入湿盒中，室温20 min。甩干不洗；

6.孵育一抗：滴加适当稀释的一抗，对照组滴加等量PBS，4℃冰箱过夜；；

7.加荧光二抗：PBS浸洗3次，每次3 min，吸干切片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中37℃孵育1h，PBS浸洗3次；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量避光操作；

8.复染核：滴加DAPI避光孵育5 min，对标本进行染核，PBS 4次洗去多余的DAPI；；

9.封片：防荧光淬灭封片剂封片、荧光显微镜观察。

今天关于免疫荧光染色操作步骤以及目的已经全部介绍完了~如果您在实验过程中遇到技术问题，或者需要实验外包和代做，可与我们技术老师联系18570028002（微信同号）