免疫荧光染色步骤由普拉特泽生物病理实验平台为大家总结分享。普拉特泽生物为广大科研人员提供长期稳定的免疫荧光染色外包实验服务，本文给大家分享咱们技术长期总结下来的免疫荧光染色步骤以及目的——细胞篇

一、实验目的

通过细胞免疫荧光技术，检测p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231细胞中的表达。

二、实验样品及分组

细胞：MCF-7、MDA-MB-231

指标：P53（proteintech10442-1-AP）

三、实验结果

MDA-MB-231

图1  IF染色图200

四、实验结论

IF染色结果显示：

p53蛋白在MCF-7、MDA-MB-231有表达，阳性染色为相应荧光素标记的绿色，胞核为DAPI标记的蓝色。

五、实验材料

1、主要仪器

2、主要试剂 

六、实验原理

免疫荧光细胞是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗原抗体复合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发光的照射而发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定含量。

七、实验步骤

(1)在培养板中将已爬好细胞的玻片用生理盐水浸洗3次；

(2)用4%的多聚甲醛固定爬片15 min， 生理盐水浸洗玻片3次；

(3)0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透15min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；

(4)生理盐水浸洗玻片3次，吸干生理盐水；

(5)每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗，4℃孵育过夜；

(6)加荧光二抗：生理盐水浸洗爬片3次，每次3 min，吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中37℃孵育1h，生理盐水浸洗3次；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量避光操作；

(7)复染核：滴加DAPI避光孵育5 min，对标本进行染核，生理盐水4次洗去多余的DAPI；

(8)在荧光显微镜下观察采集图像。

好啦，免疫荧光染色步骤我们就简单介绍到这里啦，同学们有没有一个简单的了解呢？不懂得可以给客服留言技术给您详细解答。下一篇再详细为大家介下一篇我们详细讲解免疫荧光组织篇，普拉特泽生物誓让大家透彻免疫荧光染色实验的检测过程。当然若果您有免疫荧光实验方法或其他医学科研实验外包的需求，欢迎随时咨询：18570028002（微信同号）哦