外泌体提取的具体方法及步骤
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
外泌体提取的具体方法及步骤由普拉特泽生物工具平台总结分享,工具平台为广大科研实验人员提供外泌体提取实验服务,先一起来学习学习外泌体提取的具体方法及步骤吧~
以下是外泌体提取的详细步骤:
样本收集:根据实验需要,选择合适的样本,如细胞培养上清液、血浆、尿液等含有外泌体的样本。收集样本时要注意避免细胞碎片和大颗粒物质的污染。
样本预处理:将样本进行低速离心,通常在300-2,000 g的离心力下离心10-20分钟,以去除细胞碎片和大颗粒物质。离心条件可以根据样本类型和实验要求进行调整。
进一步离心:将上一步得到的上清液进行更高速度的离心,通常在10,000-20,000 g的离心力下离心30分钟,以沉淀外泌体。离心时间和离心力可以根据样本类型和实验要求进行调整。
洗涤:将外泌体沉淀用PBS(磷酸盐缓冲液)或其他合适的洗涤缓冲液进行洗涤,去除杂质。洗涤时可以轻轻搅拌或振荡,以帮助去除杂质。
再次离心:将洗涤后的外泌体沉淀用更高速度的离心力离心,通常在100,000 g的离心力下离心1小时,以沉淀外泌体。离心时间和离心力可以根据样本类型和实验要求进行调整。
上清液去除:将上清液尽量去除,保留外泌体沉淀。可以使用吸管或移液器小心地吸除上清液。
再次洗涤:将外泌体沉淀用PBS或其他合适的洗涤缓冲液进行再次洗涤,去除残留的杂质。洗涤时可以轻轻搅拌或振荡。
再次离心:将洗涤后的外泌体沉淀用更高速度的离心力离心,通常在100,000 g的离心力下离心1小时,以沉淀外泌体。离心时间和离心力可以根据样本类型和实验要求进行调整。
上清液去除:将上清液尽量去除,保留外泌体沉淀。可以使用吸管或移液器小心地吸除上清液。
再次洗涤:将外泌体沉淀用PBS或其他合适的洗涤缓冲液进行再次洗涤,去除残留的杂质。洗涤时可以轻轻搅拌或振荡。
最后一次离心:将洗涤后的外泌体沉淀用更高速度的离心力离心,通常在100,000 g的离心力下离心1小时,以沉淀外泌体。离心时间和离心力可以根据样本类型和实验要求进行调整。
上清液去除:将上清液尽量去除,保留外泌体沉淀。可以使用吸管或移液器小心地吸除上清液。
再次洗涤:将外泌体沉淀用PBS或其他合适的洗涤缓冲液进行再次洗涤,去除残留的杂质。洗涤时可以轻轻搅拌或振荡。
外泌体沉淀的保存:将洗涤后的外泌体沉淀用适当的缓冲液进行悬浮,可以用于后续的实验分析。外泌体可以在-80°C的冰箱中保存,避免多次冻融。
需要注意的是,外泌体提取的具体方法和步骤可能会因实验目的、样本类型和实验条件的不同而有所变化,上述步骤仅供参考。在进行外泌体提取实验时,应根据具体情况进行优化和调整。
好啦,外泌体提取的具体方法及步骤我们就简单介绍到这里啦,同学们有没有一个简单的了解呢?不懂得可以给客服留言技术给您详细解答。下一篇再详细为大家介绍如何正确提取外泌体,普拉特泽生物誓让大家透彻学习提取外泌体的过程。当然若果您有提取外泌体或其他医学科研实验外包的需求,欢迎随时咨询哦