番红固绿染色实验步骤由普拉特泽生物病理实验平台为大家总结分享，本文给大家分享咱们技术长期总结下来的关于番红固绿染色的原理，实验步骤以及需要注意什么：

一、番红固绿染色原理

番红固绿染色原理是一种组织学染色方法，常用于对组织切片中胶原纤维和肌纤维进行染色。该方法的原理是：组织切片首先经过甲醛等固定剂固定，然后使用番红（Ponceau S）染色，番红可染色蛋白质和胶原纤维，使它们变为粉红色。接下来再用酸性绿染色剂染色，酸性绿主要染色肌肉纤维，使它们呈绿色。经过两种染色后，胶原纤维和肌肉纤维就可以清晰地区分出来，呈现出不同的颜色，使组织结构更加明显。

二、实验步骤

1 脱蜡

1) 70 ℃烤片30 min；

2) 二甲苯（I）中脱蜡10 min；

3) 二甲苯（II）中脱蜡10 min；

4) 100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

5) 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；

2 水化

1) 95%乙醇中水化5 min；

2) 85%乙醇中水化5 min；

3) 75%乙醇中水化5 min；

4) 蒸馏水中水化待用；

3 染色

1) 番红染色1-2 h；

2) 流水稍洗；

3) 固绿染色1min 左右；

4 脱水

1) 无水乙醇脱水5 min；

2) 无水乙醇脱水5 min；

5 透明

1) 二甲苯（I）透明5 min；

2) 二甲苯（II）再次透明5 min；

6 封片

在石蜡切片的中央滴加一滴中性树胶，盖上盖玻片封固。

7镜检

显微镜下观察拍照。
                          （附番红固绿染色实验的图片）

三、番红固绿染色要注意什么


番红固绿染色是一种较为简单的染色方法，但在进行染色过程中，还是有一些需要注意的事项：

固定时间要适当：组织切片在进行染色前需要用固定剂进行固定，固定时间过长或过短都会影响染色效果。固定时间过长会导致细胞变性、胶原纤维变硬、失去染色能力，而固定时间过短会导致细胞和组织结构失去完整性，影响染色效果。

染色剂的使用量要合适：番红和酸性绿的使用量要根据组织切片的大小适当调整，过多或过少都会影响染色效果。通常情况下，每次使用的染色剂量要比组织切片的体积多一些，以充分覆盖整个组织切片。

染色时间不能过长：番红固绿染色时间一般在10-20分钟之间，时间过长会导致颜色变深，影响观察效果。

染色后要彻底洗涤：染色后要用大量的蒸馏水和乙醇洗涤组织切片，去除多余染色剂，否则会影响观察效果。

染色后要及时封片：染色后的组织切片要尽快进行封片，以避免染色剂的挥发和蒸发，影响染色效果。

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