今天普拉特泽生物来跟大家一起学习动物细胞的培养，本单元应大家关于细胞培养传代冷冻复苏的各种技术问题而出。普拉特泽细胞实验平台专业承接原代细胞分离、培养、诱导分化等细胞实验的各种基础准备工作，经手操作大量的生物细胞资源，总结出一套简单适合大多数动物细胞分离与培养传代的经验，一起来看看吧！

        动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

        我们常见的动物细胞培养种类主要分为，原代细胞培养与传代细胞培养，今天我们来看看原代细胞培养的详细步骤！

        原代细胞培养是指将动物各种组织从机体中取出，经各种胰蛋白酶、螯合剂或机械方法处理，分散成单细胞，在合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。培养的细胞为正常的动物细胞，一般培养10代后不再增殖，死亡。

        我们培养动物的原代细胞主要分为取材、漂洗、剪切、消化、制备单细胞悬液、接种、培养等步骤，咱们一个一个看（以小白鼠为例）：

        1、待培养细胞组织取材

        颈椎脱臼法处死小白鼠，放在100ml的烧杯中用70%乙醇消毒3min。用剪刀剪开腹部，取出肾、肝、脾(任意一种脏器)。

        （1）将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1%新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。

        （2）将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔

        2、清洗组织

        在盛有PBS缓冲液平皿中洗涤数次，剔除包膜、结缔组织，将剔除后的脏器放入另一个盛有PBS的平皿中。

        3、剪切组织

        将肾、肝、脾剪成1mm3(剪成肉末状)大小的组织块，再次清洗，洗去残留的血细胞，以备消化。

        4、消化组织

        （1）在50 ml离心筒中加入0.25%胰蛋白酶溶液25ml在温暖的环境中或置于37°水浴摇床中轻轻摇动15 min，转速约为180r/min。

        （2）让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50 ml的离心管中，该管内按照每10 ml上清加入Im小牛血清的比例加入生血清以灭活胰蛋白酶。(小牛血清在共用无菌操作台上取用)

        （3）在离心管中残留未消化组织块中再次加入胰蛋白酶进行消化，重复以上1和2步骤。

        5、制备单细胞悬液

        （1）将混合的细胞悬液离心，1200 rpm，5 min，弃上清。

        （2）将沉淀用新鲜的无菌PBS重悬，再1000-1200 rpm，5 min离心。

        （3）用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止，然后再按照第一步进行离心，离心后弃去上清液，将沉淀用少量细胞培养液反复吹打，制成细胞悬液。

        6、细胞接种

        （1）将细胞悬液接种到细胞培养瓶中。

        （2）用滤器过滤细胞培养液再悬沉淀，并使终体积为20 ml。

        7、细胞培养

        （1）在培养瓶外做好标记(标明所培养细胞的名称和时间)，

        （2）置于CO₂的孵箱中培养，

        （3）72h后即可观察。

        好啦，那关于动物细胞培养的原代细胞分离与培养步骤我们就介绍到这里啦，当然不一定所有的细胞培养步骤都一模一样，有一些要用特定的培养基与培养条件，如果有不懂的实操问题或有细胞实验需外包与代做，可以随时给客服留言，普拉特泽的技术会第一时间给到您回复的哦！