MTT法检测细胞增殖由普拉特泽生物为大家总结分享，文末附上细胞常见实验理论+实操视频教程，供大家观看学习。普拉特泽细胞实验平台专业提供细胞增殖检测外包服务，积累了大量的细胞增殖检测的经验与案例，今天就跟大家分享一下MTT法检测细胞增殖的原理与步骤。

        首先是MTT法检测细胞增殖的原理：

        MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的甲瓒结晶，甲瓒结晶的生成量仅与活细胞数目成正比。还原生成的甲瓒结晶可以用DMSO来溶解，利用酶标仪测定570 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。

        其次就是MTT检测细胞增殖的详细步骤：

        1.接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.

        2.培养细胞：同一般培养条件，培养2-3天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。

        3.显色：分别培养不同时间，每孔加MTT溶液（5mg/mL用PBS 配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150uL DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。

        4.比色：选择570nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

        结果：以时间为横轴，光吸收值为纵轴绘制细胞生长曲线或计算细胞生长抑制率、细胞相对增殖率等。

        最后就是MTT法检测细胞增殖的注意事项：

        1、培养好目的细胞

        将目的细胞培养好是一切细胞实验的基础。如果不知道如何培养细胞，可查看相关的文献，不同细胞有各自的不同特点，可根据自己的实验要求及培养经验适当调整。培养细胞的过程中，注意无菌操作，切记引起细胞污染。

        2、细胞铺板

        将细胞培养一段时间后，大概了解细胞的增殖情况。根据细胞的生长情况反推铺板时的细胞浓度。将消化后的细胞反复吹打，充分混匀尽量使细胞消化成单个细胞，计数再铺板。此时，注意不要过分依赖细胞计数，因为细胞计数时，取样量较多（10mL），存在细胞颗粒的不均匀分布会直接影响后期实验，故掌握细胞计数，但细胞铺板时不能完全依赖它。选择适当的细胞接种浓度。

        3、避免血清干扰

        一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。

        4、设空白对照

        与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。其他试验步骤保持一致，

        最后比色以空白调零。

        5、加MTT

        如果待检测药物有氧化还原性，则加MTT前换一次液或用PBS将细胞清洗一遍，防止待测药物将MTT还原成棕褐色沉淀，影响实验结果。注意，加入MTT溶液时，在避光条件下进行。

        6、MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间，超出这个范围就不是直线关系。

        好啦，细胞增殖检测MTT法我们就介绍完啦！细胞增殖检测理论操作视频点击：《细胞实验》，还有更多关于细胞增殖检测技术问题咨询或者代做细胞增殖检测实验的需求可以给我们留言，技术会一一回复~祝您实验顺利哦，我们下期见！