非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型评估指南由普拉特泽生物动物检测平台总结分享，动物检测平台为广大科研实验人员提供非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型外包实验服务
可以准确评估肝脏脂质积累和氧化应激水平是研究其发病机制的关键。本篇将深入解析评估NAFLD模型脂质代谢和氧化应激的8大核心技术，从基础检测到前沿方法，助您获得可靠实验数据

一、脂质积累评估：4大金标准检测方案

1. 组织油红O染色（定性分析黄金标准）

⒈操作要点：

冰冻切片厚度8μm

60%异丙醇预处理1分钟

油红O工作液染色15分钟（避光）

⒉结果判读：

阳性信号：鲜红色脂滴

推荐ImageJ软件定量分析（≥5个视野）

数据参考：正常肝组织染色阳性率<5%，NAFLD模型通常>30%

2. 肝脏甘油三酯(TG)定量检测（最可靠定量方法）

▲提取方法：

氯仿:甲醇(2:1)混合提取

超声破碎提高提取效率

▲检测建议：

比色法（GPO-PAP试剂盒）

同步检测总胆固醇(TC)

▲判定标准：NAFLD模型TG含量通常>20mg/g肝组织

3. 小动物MRI-PDFF（无创定量新技术）

●技术优势：

可重复动态监测

空间分辨率达0.1mm³

●参数设置：

TE=2.3ms，TR=150ms

脂肪分数>5%判定异常

4. 质谱成像（空间脂质组学）

●应用价值：

定位特定脂质分布

发现差异脂质分子

●样本处理：

新鲜冰冻切片

避免使用固定剂

二、氧化应激评估：4大关键指标系统

1. 丙二醛(MDA)检测（脂质过氧化标志）

检测方法：

TBA比色法（532nm吸光度）

需新鲜组织避免降解

结果解读：

①NAFLD模型通常升高2-3倍

②正常范围：1-2nmol/mg蛋白

2. 超氧化物歧化酶(SOD)活性

检测原理：

抑制WST-1还原反应

单位定义：50%抑制率为一个活性单位

临床意义：

NAFLD患者常降低30-50%

3. 谷胱甘肽系统（GSH/GSSG比值）

样本处理：

预冷PBS冲洗

加入5%磺基水杨酸稳定

检测要点：

DTNB法测总GSH

酶循环法测GSSG

判定标准：健康肝脏GSH/GSSG>10:1

4. 8-OHdG检测（DNA氧化损伤标志）

先进方法：

ELISA检测（灵敏度0.1ng/ml）

免疫组化定位

科研价值：

早期氧化损伤敏感指标

与纤维化程度正相关

三、实验设计关键点

⒈样本采集标准化流程

⑴禁食处理：统一禁食6小时

⑵取材时间：固定上午8-10点

②分装保存：

生化检测：-80℃速冻

氧化指标：液氮速冻后-80℃保存

2. 质量控制措施

内参设置：

蛋白浓度校正（BCA法）

组织重量归一化

技术重复：≥3次独立实验

3. 数据关联分析

脂质-氧化应激相关性：

TG含量与MDA水平Pearson分析

油红O阳性率与SOD活性回归分析

四、前沿技术展望

单细胞脂质组学：

揭示肝细胞异质性

10x Genomics平台应用

活体自由基成像：

新型分子探针（如MitoSOX）

双光子显微镜观察

多组学整合分析：

⑴转录组+代谢组联合

⑵机器学习模型预测

五、常见问题解决方案

1. 脂质提取不完全

优化方案：

增加超声破碎（冰浴，30%功率）

延长提取时间至24h

2. 氧化指标不稳定

应对措施：

全程冰上操作

添加蛋白酶抑制剂

分装避免反复冻融

3. 组间差异大

改进方法：

统一取材部位（肝左叶）

增加样本量（n≥8）

标准化饲养条件

结语：4步构建完美评估体系

①多方法验证：组织染色+生化定量+影像学

②动态监测：设立多个时间点

③全程质控：标准化操作流程

④机制关联：整合脂质代谢与氧化应激数据

掌握这些核心技术，您的NAFLD研究将更具深度和说服力！立即收藏这份实用指南，助力科研突破！

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好，非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型

精准检测脂质积累与氧化应激的8大方法

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