肝纤维化模型实验步骤由普拉特泽生物动物实验平台为大家总结分享。普拉特泽生物为广大科研人员提供长期稳定的肝纤维化实验外包
本文给大家分享咱们技术长期总结下来的肝纤维化模型实验步骤：
一、实验准备

1. 材料准备

细胞：肝星状细胞、肝细胞等

动物：小鼠、大鼠等

试剂：CCl4、TAA、TGF-β1等

仪器：显微镜、离心机、PCR仪等

2. 实验设计

①确定研究目的和模型类型

②制定详细的实验方案和时间表

③准备实验记录表格

二、体外模型实验步骤

1. 细胞培养

(1) 细胞复苏

从液氮中取出冻存细胞

37℃水浴快速解冻

离心去除冻存液，重悬于培养基

(2) 细胞传代

①弃去旧培养基

②PBS洗涤细胞

③加入胰酶消化

④离心收集细胞，按比例传代

2. 细胞模型构建

(1) HSC激活模型

①接种HSC于培养板

②加入TGF-β1（5ng/mL）刺激

③培养48-72小时

(2) 共培养模型

①分别培养HSC和肝细胞

②按比例混合接种于Transwell小室

③共培养3-5天

3. 样本收集与检测

(1) 细胞形态观察

①倒置显微镜观察

②拍照记录

(2) 蛋白检测

裂解细胞提取蛋白

Western blot检测α-SMA、Collagen I等

(3) RNA检测

TRIzol法提取RNA

qPCR检测纤维化相关基因
三、体内模型实验步骤

1. 动物准备

选择6-8周龄小鼠

适应性饲养1周

随机分组

2. 模型构建

(1) CCl4诱导模型

配制10%CCl4橄榄油溶液

腹腔注射，5μL/g体重

每周2次，持续4周

(2) TAA诱导模型

配制300mg/kg TAA溶液

腹腔注射，每周3次

持续6周

3. 样本采集

(1) 血清采集

眼球取血或心脏穿刺

离心分离血清

-80℃保存

(2) 肝脏采集

⒈颈椎脱臼法处死小鼠

⒉取出肝脏

⒊部分固定于4%多聚甲醛

⒋部分冻存于液氮

5. 检测分析

(1) 血清生化指标

ALT、AST检测

羟脯氨酸含量测定

(2) 组织学检查

石蜡包埋、切片

HE染色、天狼星红染色

显微镜观察并拍照

(3) 分子生物学检测

⒈Western blot检测纤维化标志物

⒉qPCR检测相关基因表达

四、数据分析

1. 数据整理

整理实验记录

建立数据库

2. 统计分析

使用GraphPad Prism等软件

t检验或方差分析

p<0.05认为有统计学意义

3. 结果呈现

制作图表

撰写实验报告

五、注意事项

1. 细胞实验

严格无菌操作

控制细胞密度

注意细胞状态

2. 动物实验

遵守动物伦理规范

注意动物福利

准确记录实验数据

3. 安全防护

佩戴防护装备

规范处理实验废物

注意化学品安全

六、常见问题及解决方案

1. 细胞污染

加强无菌操作

定期检测支原体

2. 模型不稳定

优化诱导条件

增加样本量

3. 数据偏差

⑴规范实验操作

⑵设置重复实验

肝纤维化模型的构建是一个系统的过程，需要研究人员具备扎实的理论基础和熟练的实验技能。通过严格遵循实验步骤，不断优化实验条件，才能获得可靠的实验结果，为肝纤维化研究提供有力支持。

本文详细介绍了肝纤维化模型的实验步骤，包括体外细胞模型和体内动物模型的构建方法，涵盖实验准备、模型构建、样本采集、检测分析等全流程，为肝纤维化研究提供实用指南。

要资质有资质

要经验有经验

要案例有案例

好，肝纤维化模型实验步骤就介绍到这里啦~

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