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cck8检测原理和实验步骤

2023-03-10 11:10:32

来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台

    CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测实验是一种广泛用于评估细胞生存率和细胞增殖能力的试剂盒。

    CCK-8检测实验原理是基于其反应机制,基于细胞线粒体呼吸活性的变化,即细胞内还原剂可以将CCK-8试剂内的三唑基四氮唑(WST-8)还原成有色产物。这种有色

    产物可以通过吸光度测量的方式进行定量分析,从而评估细胞数量和代谢活性。

    以下是CCK8检测的步骤:

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    1.培养细胞:将需要检测的细胞分装到培养皿中,添加培养液,使其继续生长和分裂。


    2.处理药物:将需要检测的药物按照一定的浓度加入培养液中,使其与细胞接触。


    3.添加CCK8试剂:在一定时间后,将CCK8试剂加入培养液中,使其与细胞接触。


    4.孵育:将培养皿放入恒温培养箱中,孵育一定时间,使CCK8试剂与细胞产生反应。


    5.测量:测量培养皿中吸光度的变化,可以通过酶标仪等设备测定吸光度值,计算出细胞的增殖率和毒性。


    CCK8试剂中含有水溶性四唑盐(WST-8)和电子传递介体1-甲基三唑基甲烷(MTT)类似,它可以被细胞内线粒体呼吸链中的酶还原成橙色产物,这个橙色产物的含

    量与细胞数量和代谢活性有关,因此可以通过检测橙色产物的浓度来判断细胞的增殖率和毒性。


    CCK-8试剂盒中的WST-8是一种水溶性化合物,在存在还原剂(如NADH、NADPH等)的情况下,可以被还原成高度水溶性
的有色产物formazan。这种产物的形成与细胞


    代谢活性相关,因此可以用于定量评估细胞增殖和存活率。


    总体而言,CCK-8试剂盒是一种方便、快速和准确的细胞代谢活性评估工具,适用于各种细胞类型和实验设计。