外周血单细胞悬液制备步骤由普拉特泽生物细胞实验平台分享，细胞实验平台专为大家提供各类细胞实验外包服务。单细胞悬液是把组织块或贴壁培养的细胞消化吹打以后形成的悬液，使粘连的细胞都分开，细胞本身是很脆弱的，解离过程中稍不注意就有可能导致细胞死亡，时间的长短、浓度的大小、枪头的使用，离心的设置等都会影响细胞的状态，本文咱们就以外周血和贴壁细胞样本为例，为大家介绍单细胞悬液的制作方法。

        ⼀、外周⾎样本单细胞悬液制作步骤

       ⼈外周血单个核细胞（Peripheralblood mononuclear cells ，PBMCs ）的分离制备：

        1、医院及其⾎液中⼼采取的新鲜的肝素抗凝的2 mL外周静脉⾎备⽤；

        3、将肝素抗凝的静脉⾎⽤等体积的PBS稀释并充分混匀；

        3、将⼈淋巴细胞分离液ficoll从 4 °C 取出，恢复⾄室温，取4ml转移⾄15 mL 试管中备⽤；

        4、⽤⽆菌吸管吸取稀释后的静脉⾎，沿管壁缓慢⼊⾄⼈淋巴细胞分离液液⾯上

        （ficoll分离液：抗凝⾎1:1），缓缓地不要晃荡，保持界⾯的清楚；

        5、将加完外周静脉⾎后的 50 mL 试管放⼊台式离⼼机中，2200 rpm ⽔平离⼼，

        室温 25 min，注意离⼼机升降速都调⾄最慢，降速设置中⼀定要设置成no break，或者只有1成

        的制动。

        6、离⼼完毕后，⼩⼼取出15 ml 试管，离⼼后管内可分为三层，在上、中层界⾯处有⼀层以单

        个核细胞为主的⽩⾊云雾层狭窄带，即为我们所需要的单个核细胞；

        7、⽤⽆菌吸管吸取⽩⾊云雾层狭窄带的单个核细胞，并置于另⼀ 15 mL 离⼼管

        中，加⼊5 mLPBS，1500 rpm，室温离⼼ 5 min，并充分洗涤细胞两次；

        8、末次离⼼后，弃去上清，加⼊完全 RPMI 1640 培养液重悬细胞，充分混匀；

        9、⽤⽩细胞计数液计数单个核细胞，根据实验所需，加⼊完全 1640培养液调整细胞浓度到所需要的浓度。

        二、贴壁细胞样本单细胞悬液制作方法

        贴壁细胞（adherent cells）：活体体内细胞当离体置于体外培养时⼤多数以贴壁⽅式⽣长，主要包括正常细胞和肿瘤细胞。

        胰蛋⽩酶消化

        胰蛋⽩酶：最常⽤，浓度⼀般0.25%-5%，37℃消化时间⼀般1-5min，⽤⾎清终⽌；

        外周血与贴壁细胞的单细胞悬液制作方法就介绍完啦，希望能帮到正在准备学习单细胞悬液制备的你~如果您还有什么其他问题欢迎随时联系，普拉特泽生物随时在线~