cck8法检测细胞增殖法由普拉特泽生物细胞实验平台为大家总结分享，文末附上细胞增殖检测的理论与实操视频教程供大家学习。上两篇咱们简单学习了一下细胞增殖的介绍与检测细胞增殖的七种方法，一直在普及细胞增殖检测的理论知识，今天终于开始学习细胞增殖检测的实操步骤啦。上两篇理论链接奉上：
                                              细胞增殖检测——什么是细胞增殖？
                                             细胞增殖检测——细胞增殖检测方法汇总

        今天，普拉特泽给大家分享的是细胞增殖检测种最常用的检测方法，cck8法检测细胞增殖。Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。话不多说来上干货吧：

        以cck8法检测细胞的增殖能力为例：

        一、准备cck8检测细胞增殖实验器材

        实验仪器：CO2恒温培养箱、光学倒置显微镜、超净工作台、血球计数板

        实验试剂与耗材：DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰酶、6cm细胞培养皿、抗生素、96孔细胞培养板、CCK-8

        二、cck8检测操作步骤

        1、细胞复苏

        （1）将ddH2O预温至37℃。

        （2）戴上手套和口罩帽子，从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管，立即投入37℃ ddH2O中，轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

        （3）完全溶解后，75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

        （4）在超净台中，在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基，打开冻存管，将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中，常温1000 rpm离心3分钟，吸除上层的培养液。

        （5）1mL培养基重悬细胞沉淀，轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中，补足培养基至5 mL，置于37℃、5% CO2培养箱培养。

        （6）48小时后换液，细胞融合接近80%时即可传代。

        2、细胞增殖待测细胞预处理

        细胞放在专用的培养基内，在适宜待测细胞温度湿度的培养箱中培养。

        3、 CCK-8检测实验

        (1) 取生长状态良好的各组细胞用0.25%胰酶消化后，细胞计数。

        (2) 将细胞种到96孔板中，密度为7000个细胞/孔。

        (3) 各组细胞在检测时间点时，每孔加1/10体积 CCK-8，在37℃、5％CO2培养箱中培养2小时。

        (4)选择450 nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

        (5) 通过Gradpad软件计算并绘制细胞增殖曲线图。

        好了，cck8法检测细胞增殖的想着操作步骤就介绍到这里啦，观看视频课程点击：cck8检测细胞增殖视频教程，没有看懂有疑问或者还有要补充操作流程的同学欢迎随时留言，如果您需要细胞增殖检测实验外包或待测的需求，欢迎选择普拉特泽生物！