一、GUS染色实验目的与原理

GUS染色的实验目的是对植物样本进行染色，因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性，因此GUS基因广泛用作转基因植物的报告基因。

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一种报告基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶是一种水解酶，能催化许多β-葡萄糖苷酯类物质的水解，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，缩写为X-Gluc）分解为蓝色物质。

二、GUS染色实验方法

（1）组织化学染色定位方法

（2）荧光法测定GUS活性

（3）分光光度法测定GUS活性

三、GUS染色实验步骤

以某植物样本为例：

step1: 90%丙酮固定20 min;

(丙酮(acetoue)渗透力很强，能使蛋白质沉淀凝固，但不影响蛋白质的功能基团而保存蛋白质的活性，用于固定磷酸酶和氧化酶效果较好，因此可用于GUS染色前的固定，可防止GUS信号的扩散。特点是固定快、渗透力强，易使组织细胞收缩；但保持细胞结构的能力欠佳。固定方法：一般4℃下20分钟为宜。)

Step2 : 加1 mL GUS洗液洗去丙酮，洗2遍:

Step3 : 加GUS染色液，冰上抽真空15-20 min;

Step4 : 37°C放置，隔一阵观察一下，染上色了就进行下面步骤

Step5 : 吸出染色液，加入1 mL 70%乙醇，停止染色反应及脱色

Step6 : 更换几次乙醇直到脱色完全

Step7 : 解剖镜及显微镜拍照观察

载玻片上加适量HCG透明液，用镊子取出幼苗在透明液中铺平，盖上盖玻片，解剖镜观察整株，显微镜观察细节并拍照。